19 października, 2020
Protokół o tym, jak rozpuszczać białka błonowe za pomocą CHAPS
- Przemyć komórki lodowatym PBS.
- Zawieś ponownie komórki w lodowatym buforze TE (10 mM Tris, pH 7,4, 2 mM EDTA).
- Umyć 2x w lodowatym TE (wirować przy 40 000 x g, za każdym razem 8 minut).
- Do 36 mM CHAPS w PBS, mieszając w niskiej temperaturze (np. Na lodzie lub w chłodni), dodaj kroplami komórki, które są ponownie zawieszone w ~ 1 ml buforu TE.
- Rozpuścić białka mieszając przez 30 minut w chłodni po dodaniu komórek, które zostały wkroplone.
- Wirować solubilizowaną próbkę przy 100 000 x g, 10 minut.
- Użyć supernatantu, który zawiera rozpuszczone białka, do analizy lub dalszego oczyszczania.