19 października, 2020
Solubilizacja białek błonowych z protokołem Triton X-100
Wymagane rozwiązania:
10 mM Tris, 2 mM EDTA (bufor TE)
2% Triton w PBS (sporządzić roztwór podstawowy 20% Triton X-100, odważając 2 g Triton X-100, dodając PBS do 10 ml, kołysząc lub delikatnie mieszając przez noc; przechowywać roztwór podstawowy w lodówce w 4 stopniach C).
- Zawieś ponownie komórki w buforze TE.
- Prać 2x w TE (wirować przy 40 000 x g, za każdym razem 8 minut).
- Do 2% Triton w PBS podczas mieszania, dodać kroplami komórki ponownie zawieszone w ~ 1 ml TE.
- Po wkropleniu komórek rozpuszczać przez 30 minut w chłodni.
- Wirowanie przy 100 000 x g, 10 minut.
- Weź supernatant.