automatyka-robotyka
October 19, 2020

Solubilizacja białek błonowych z protokołem Triton X-100

By Pawel

Wymagane rozwiązania:
10 mM Tris, 2 mM EDTA (bufor TE)

2% Triton w PBS (sporządzić roztwór podstawowy 20% Triton X-100, odważając 2 g Triton X-100, dodając PBS do 10 ml, kołysząc lub delikatnie mieszając przez noc; przechowywać roztwór podstawowy w lodówce w 4 stopniach C).

  1. Zawieś ponownie komórki w buforze TE.
  2. Prać 2x w TE (wirować przy 40 000 x g, za każdym razem 8 minut).
  3. Do 2% Triton w PBS podczas mieszania, dodać kroplami komórki ponownie zawieszone w ~ 1 ml TE.
  4. Po wkropleniu komórek rozpuszczać przez 30 minut w chłodni.
  5. Wirowanie przy 100 000 x g, 10 minut.
  6. Weź supernatant.